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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠前列腺上皮分離自前列腺組織；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官；前列腺是不成對的實質(zhì)性器宮，由腺組織和肌組織構成。前列腺如栗子，底朝上，與膀胱相貼，尖朝下，抵泌尿生殖膈，前面貼恥骨聯(lián)合，后面依直腸。前列腺腺體的中間有尿道穿過，扼守著尿道上口，所以，前列腺有問題時，排尿首先受影響。前列腺是機體非常少有的，具有內(nèi)、外雙重分泌功能的性分泌腺。作為外分泌腺，前列腺每天分泌前列腺液，是構成精液主要成分；作為內(nèi)分泌腺，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素"。前列腺上皮細胞與前列腺的功能關系密切，上皮細胞的損傷是前列腺炎的主要病癥，重度的前列腺炎患者的前列腺液內(nèi)可檢測到脫落的上皮細胞，這是上皮細胞損傷的標志。炎癥發(fā)生時，與炎癥相關的一些炎癥因子可能發(fā)生變化。因此，體外培養(yǎng)前列腺上皮細胞是研究前列腺炎及前列腺上皮肉瘤等疾病的前提和基礎。前列腺主要特征如下：①前列腺結構和功能活動均受雄性激素的調(diào)控；②基底細胞主要表達高分子量細胞角蛋白（CK-5、CK-14），基底上皮細胞可分化成管腔上皮細胞；③前列腺上皮細胞的培養(yǎng)為研究前列腺的許多重要特性以及化學和激素性致癌作用提供了機會。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠前列腺上皮采用先消化、后膠原酶-聯(lián)合消化并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠前列腺上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人樁蛋白試劑盒   人樁蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人樁蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人樁蛋白試劑盒、人樁蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人乙脫氫酶試劑盒   人乙脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人乙脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人乙脫氫酶試劑盒、人乙脫氫酶試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人   人   規(guī)格型號：96T/48T   人，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人、人   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人心肌錨蛋白重復域1試劑盒   人心肌錨蛋白重復域1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人心肌錨蛋白重復域1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人心肌錨蛋白重復域1試劑盒、人心肌錨蛋白重復域1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豚鼠鉤端IgG(Lebtospira)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 人細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒

humanβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit 人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCyclicguanosinemonophosphate,cGMP試劑盒人環(huán)0酸鳥苷(cGMP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織FGFR3激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanprimaryhepaticcarcinoma,PHCELISAKit人肝癌抗原(PHC)試劑盒規(guī)格：96T/48T

G-250快速無毒型蛋白質(zhì)染色試劑 100ml

Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein 0.5mgTsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗原

NCR3重組人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

IL23 Protein Human 重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

IL1RAP Protein Human 重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 標簽)

Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein 0.5mgTsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗原

IL23 Protein Human 重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

G-250快速無毒型蛋白質(zhì)染色試劑 100ml

IL1RAP Protein Human 重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 標簽)

NCR3重組人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

大鼠前列腺上皮細胞兔子表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)試劑盒

HumanVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit 人內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanEsadiol,E2試劑盒人雌二醇(E2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織SPHK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit人孤腓肽(OFQ/N)試劑盒規(guī)格：96T/48T