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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔卵泡膜分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側發(fā)育（右側已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構，而所有鳥類只有左側卵巢有機能。卵巢是位于子宮兩側的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結締組織。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質。皮質位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結締組織構成；髓質位于中央，由疏松結締組織構成，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。哺乳動物的卵巢內卵泡的發(fā)育需要相關激素的調節(jié)才能完成，垂體（卵泡刺激素和黃體生成素）使原始卵泡開始發(fā)育，其過程中還產(chǎn)生大量的雌激素。雌激素是卵巢的顆粒細胞和卵泡膜細胞在垂體的作用下協(xié)同合成的，卵泡膜細胞合成的雄激素透過基膜進入顆粒細胞，并轉變?yōu)榇萍に亍Ｒ虼耍雅菽ぜ毎谏硟确置谡{節(jié)中占有關鍵的位置，了解其在病理及生理中的作用，對于與性激素有關的婦產(chǎn)科疾?。ㄈ缍嗄衣殉簿C合癥、卵巢癌等）的研究有著重要意義。在哺乳動物卵泡生長發(fā)育的過程中，卵母細胞由不斷增加的顆粒細胞層包裹。卵巢組織中的膜細胞作為卵泡的外層細胞可以維持卵泡結構的完整性，參與構成卵母細胞和顆粒細胞發(fā)育的微環(huán)境且為類固醇激素的生成提供底物。在哺乳動物中調節(jié)膜細胞類固醇激素生成的機制已見相關報道，但是有關卵泡膜細胞的聚集、生長和分化的研究尚不深入。

方法簡介：

實驗室分離的兔卵泡膜采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔卵泡膜經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔卵泡膜體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠補體蛋白4(C4)檢測試劑盒 ，英文名： C4 ELISA Kit

Mouse alpha 1 acid glycoprotein (1-AGP) ELISA Kit 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)檢測試劑盒

ELISA 小鼠內皮素-1(mouse Endothelin-1)  進口分裝

CLIAKitforKP(Humankaliureticpeptide)ELISAKit人利尿肽

通用型半胱(cysteine)含量比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitt-PA大鼠組織型纖溶酶原激活劑

AHSG重組人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 蛋白 Protein

上皮中性粒細胞激活肽78(ENA78)重組蛋白 Recombinant Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78 (ENA78)

IL31重組人 IL-31 / IL31 蛋白 Protein

ICAM2 Protein Human 重組人 ICAM-2 / CD102 蛋白

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

上皮中性粒細胞激活肽78(ENA78)重組蛋白 Recombinant Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78 (ENA78)

ICAM2 Protein Human 重組人 ICAM-2 / CD102 蛋白

AHSG重組人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

IL31重組人 IL-31 / IL31 蛋白 Protein

小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human gasic carcinoma marker ELISA Kit 人胃癌標志物檢測試劑盒

HumanUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3ELISAKit 人高敏三甲狀腺原(u-T3)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanComplemefragme4a,C4a檢測試劑盒人過敏毒素/補體片斷4(C4a)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CDK1/CYCLINB激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Humanproteolipidprotein,PLPELISAKit人蛋白脂質蛋白抗體(PLP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔卵泡膜細胞兔白細胞介素15檢測試劑盒   兔白細胞介素15試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔白細胞介素15試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細胞介素15試劑盒、兔白細胞介素15檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔白介素17檢測試劑盒   兔白介素17試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔白介素17試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔白介素17試劑盒、兔白介素17 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔8-異構前列腺素檢測試劑盒   兔8-異構前列腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔8-異構前列腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔8-異構前列腺素試劑盒、兔8-異構前列腺素檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔6前列腺素F1a檢測試劑盒   兔6前列腺素F1a試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔6前列腺素F1a試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔6前列腺素F1a試劑盒、兔6前列腺素F1a 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。