產品名稱：支原體通用LAMP試劑盒
產品特點：支原體通用LAMP試劑盒上海一研生物相關產品：亞鐵鉀：422.39Potassium ferrocyanide：14459-95-1 K4FeC6N6·3H2O硫酸鉀：97.18Potassium thiocyanate：333-20-0 KSCN
產品型號：50次
更新日期：2021-02-20
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50次支原體通用LAMP試劑盒的詳細資料：
參數規格：
產品名稱 | 支原體通用LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Universal lamp kit for Mycoplasma |
規格 | 50次 |
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
8-甲喹啉：143.198- methyl group：611-32-5 C10H9N
4,4'-二-2,2'-聯吡：186.224,4'- two amino -2,2'-：18511-69-8 C10H10N4
2-乙氧-3-吡：249.052- -3- and：766557-60-2 C7H8INO
2--4-甲嘧：109.132- amino -4-：108-52-1 C5H7N3
7-氟-6-硝-4-羥喹唑啉：209.137- -6- nitro -4- nitro group：162012-69-3 C8H4FN3O3
偶氮胭脂紅GAzo rouge red G：579.58 C28H18N3NaO6S2：25641-18-3
5-溴喹啉：208.065- bromide：4964-71-0 C9H6BrN
亞鐵鉀：422.39Potassium ferrocyanide：14459-95-1 K4FeC6N6·3H2O
硫酸鉀：97.18Potassium thiocyanate：333-20-0 KSCN
支原體通用LAMP試劑盒人 IL10RB / CRFB4 ELISA配對抗體
甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體)
人 PLVAP 基因全長ORF克隆
人 YARS 基因全長ORF克隆
人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 AIFM2 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CDH17 基因全長ORF克隆
人 Integrin alpha5 / CD49e 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 SEMA6A 基因全長ORF克隆
小鼠 RIPK1 基因全長ORF克隆
人 PFKFB3 基因全長ORF克隆
人 ASB1 基因全長ORF克隆
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