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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒實驗技術中抗原抗體的反應
點擊次數:939 更新時間:2017-09-01

 一、抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒實驗中抗體的結構
抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白 (immunoglobulin,Ig)。Ig 分五類,即IgG、IgA 、IgM、IgD 和IgE。與免疫測定有關的Ig 主要為 IgG 和IgM。Ig 由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成。Ig 的輕鏈是相同的,有κ(kappa)和λ(Lambda )兩種型別。五類Ig 的重鏈結構不同,這決定了它們的抗原性也不同。IgG 和IgM 的重鏈分別稱為γ(gamma )鏈和μ(mu )鏈。重鏈和輕鏈的 N 端的氨基酸排列順序因各種抗體而異,稱為可變區,分別用VH 和VL 表示。兩者構成抗體的抗原結合部位,只與相應的抗原決定簇匹配,發生特異性結合,是抗體專一性結合抗原的結構基礎。
IgG 可被木瓜蛋白酶分解為三個區段,其中兩個相同的區段稱抗原結合片段(Fab )。每個Fab 都保存結合抗原的能力,但只有一個抗原結合位點,是單價的,與抗原結合后不出現凝集或沉淀。另一區段稱Fc 段,無抗體活性,但具有IgG *的抗原性。
IgG 可被分解為兩個片段,一個Fab 雙體,稱F(ab’)2,能和兩個相同的抗原結合;另一片段類似Fc,隨后被分解成小分子多肽,無生物活性。
IgM 是由五個單體組成的五聚體,含 10 個重鏈和10 個輕鏈,具有10 個抗原結合價,由于空間位置的影響,只表現為五個抗原結合價。IgM 分子量約為900000, IgG 分子量約為150000 。
機體被微生物感染后,先產生 IgM 抗體,然后產生IgG 抗體。經過一段時間,IgM 抗體量逐漸減少而消失,而IgG 抗體可存在,在疾病*后可持續數年之久。IgM 抗體一般為保護性抗體具有免疫性。因此IgM 抗體的測定,對某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價值。右圖為為甲型肝炎病人血清中IgG 抗體和IgM 抗體出現的時間和水平。
二、 抗原抗體反應
2.1 可逆性
Ag·Ab 的解離程度與K 值有關。高親和力抗體的抗原結合點與抗原的決定簇在空間構型上非常適合,兩者結合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結構和活性,因此可用親和層析法來提純抗原或抗體。在抗血清中,特異性的IgG 抗體僅占總IgG 中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體,稱為親和層析純抗體,應用于免疫測定中可得到更好的效果。
2.2 zui適比例
在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復合物(沉淀)的量見圖1-4。曲線的高峰部分是抗原抗體比例zui合適的范圍,稱為等價帶(zone of equivalence )。在等價帶前后分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶。
如果抗原或抗體極度過剩,則無沉淀物形成,抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒在免疫測定中稱為帶現象(zone phenomenon )。抗體過量稱為前帶(prezone),抗原地過量稱為后帶(postzone)。在用免疫學方法測定抗原時,應使反應系統中有足夠的抗體量,否則測得的量會小于實際含量,甚至出現假陰性。
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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒

 

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